过表达载体构建(过表达细胞系的构建)
1.首先,用某种限制性内切酶切割质粒,使质粒中出现缺口,露出粘性末端。
2.用同样的限制性内切酶切割目标基因,产生同样的粘性末端。
3.将切割的靶基因片段插入质粒切口。首先碱基互补配对组合,两个粘端吻合,碱基之间形成氢键。
4.加入适量的DNA连接酶,催化两条DNA链之间形成磷酸二酯键,从而连接相邻的脱氧核糖核酸,形成重组DNA分子。例如,人胰岛素基因通过这种方法与大肠杆菌中的质粒DNA分子结合,形成重组DNA分子。
1.首先,用某种限制性内切酶切割质粒,使质粒中出现缺口,露出粘性末端。
2.用同样的限制性内切酶切割目标基因,产生同样的粘性末端。
3.将切割的靶基因片段插入质粒切口。首先碱基互补配对组合,两个粘端吻合,碱基之间形成氢键。
4.加入适量的DNA连接酶,催化两条DNA链之间形成磷酸二酯键,从而连接相邻的脱氧核糖核酸,形成重组DNA分子。例如,人胰岛素基因通过这种方法与大肠杆菌中的质粒DNA分子结合,形成重组DNA分子。
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